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胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒
胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)测试盒
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  • 发布日期: 2019-01-11
  • 更新日期: 2019-01-11
产品详细说明
品牌: YAD CAS编号:
产地: 保存条件:
英文名称: 保质期:
货号: ICDHC-1-Y

胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)试剂盒说明书

 微量法 100 管/96 样 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 

测定意义: ICDHc(EC 1。1。1。42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱 羧生成 α-酮戊二酸,同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径 外又一种 NADPH 重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。 

测定原理: 利用 ICDHc 催化 NADP+还原成 NADPH 反应,在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。 所需的仪器和用品: 紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制: 提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 19 mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存; 试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存; 样本的前处理: 1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量 (104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样品:直接检测。 测定步骤: 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 2、 将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解;在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种) 水浴 10min 以上;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL试剂一,混匀后立即记录340nm 处 20s 后吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。 注意事项: 1、 若 A2-A1 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。

 计算公式中乘以相应稀释倍数。 2、 若 A2-A1 小于 0.005,可延长反应时间到 5min 或 10min。 ICDHc 活力单位的计算: a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、血清(浆)ICDHc 活力的计算: 单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。 ICDHc(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷V 样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 ICDHc 活力的计算:


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