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培养基制造和灭菌的办法以及步骤

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发布时间:2020-01-20


微生物培育基是供微生物成长、繁衍、代谢的混合养料。因为微生物具有不同的养分类型,对养分物质的要求也各不相同,加之研究的意图不同,所以培育基的种类许多,运用的质料也各有差异,但从养分视点剖析,微生物培育基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、成长素以及水分等。别的,培育基还应具有适合的pH值、必定的缓冲才能、必定的氧化还原电位及适宜的渗透压。为了到达特定要求的研究,需求进行培育基制造和灭菌,那么微生物培育基该怎么制造与灭菌呢?
1。调理pH值
用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测验培育基的pH值,如不契合需求,可用10%HCl或10%NaOH进行调理,直到调理到配方要求的pH值停止。
2.分装
已过滤的培育基应进行分装.如果要制造斜面培育基,须将培育基分装于试管中.如果要制造平板培育基或液体、半固体培育基,则须将培育基分装于锥形瓶内。
3。过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培育基过滤.用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
4。制造溶液
向容器内参加所需水量的一部分,按照培育基的配方,称取各种质料,顺次参加使其溶解,最终补足所需水分,对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热进程所蒸腾的水分,应在悉数质料溶解后加水补足。 
制造固体培育基时,先将上述已配好的液体培育基煮沸,再将称好的琼脂参加,持续加热至彻底消融.并不断搅拌,防止琼脂糊底烧焦。
分装时,一手捏松绷簧夹,使培育基流出,另一只手抓住几支试管或锥形瓶,顺次接取培育基。分装时,注意不要使培育基粘附管口或瓶口,防止浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培育基量,视试管和锥形瓶的巨细及需求而定。一般制造斜面培育基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制造深层培育基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培育基,一般以其容积的一半为宜。
5.制造斜面培育基和平板培育基
培育基灭菌后,如制造斜面培育基和平板培育基,须趁培育基未凝结时进行。
(1)制造斜面培育基。在试验台上放1支长0。5~1米左右的木条,厚度为1厘米左右,将试管头部枕在木条上,使管内培育基天然歪斜,凝结后即成斜面培育基。
(2)制造平板培育基。将刚刚灭过菌的盛有培育基的锥形瓶和培育皿放在试验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手翻开培育皿盖,右手敏捷将培育基倒入培育皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。铺放培育基后放置15分钟左右,待培育基凝结后,再5个培育皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后查看,如培育基末长杂菌,即可用来培育微生物。
5。加棉塞
分装结束后,需求用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的首要意图是过滤空气,防止污染。棉塞应选用普通新鲜、干燥的棉花制造,不要用脱脂棉,防止因脱脂棉吸水使棉塞无法运用。制造棉塞时,要根据棉塞巨细将棉花铺展成恰当厚度,揪取手掌心巨细一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,一起左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后,应敏捷塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为适宜。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少量棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
 

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